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本试剂盒采用稳定高效的反转录预混体系5×RT MasterMix进行RNA的反转录反应，使用时只需加入模板、引物和RNase-Free H2O即可，大大简化了操作过程、提高了效率、减少了操作过程中的人为误差。MasterMix中添加了dsDNase，可在反转录的过程中，直接降解去除RNA中残留的基因组DNA污染(可去除100ng基因组DNA)，从而在定量PCR的检测中无需考虑基因组污染的干扰，设计的定量PCR引物也无需进行横跨外显子。该试剂盒尤其适用于定量PCR检测。

该预混体系包含点突变致RNase H活性缺失的MLV Reverse Transcriptase反转录酶、dNTP、反应Buffer、gDNA去除试剂和RNase抑制剂。该试剂盒采用的反转录酶去除了RNase H活性，从而避免反转录过程中降解RNA。同时经过突变文库筛选，使得其热稳定性更强，可耐受55℃高温反应。相比于低温条件下反转录反应，采用高温反转录可显著打开RNA二级结构，从而提高复杂RNA模板的扩增性能、提高反转录cDNA的长度和产量，从而提高后续检测的灵敏度。合成的第一链cDNA可广泛用于2nd Strand的合成、杂交、PCR扩增、Real-Time PCR反应等。

• 按以下组分配制反转录反应液
  

  成分	用量
  病毒DNA/RNA样品	2～10μL
  5×RT MasterMix(with dsDNase)	4μL
  20×Random Primer	1μL
  RNase-Free H2O	Up to 20μL

  
  注：反转录引物可根据需要改用特异性引物。
  
• 根据实际情况反转录可选择快速程序或标准程序：
  
  • 快速程序：

    温度	时间	说明
    37℃	15～30min	cDNA合成
    85℃	5min	失活MLV

  • 标准程序：
    

    温度	时间	说明
    25℃	10min	引物配对
    55℃	30～60min	cDNA合成
    85℃	5min	失活MLV

    注：通常在定量PCR实验中使用快速程序进行反转录（反转录效率>80%），在进行高GC含量、含复杂二级结构、长片段的模板转录时采用标准程序（反转录效率＞100%）。